ESTANDARIZACIÓN Y VALIDACIÓN DE UN WESTERN BLOT PARA EL DIAGNÓSTICO DEL VIRUS DE INMUNODEFICIENCIA HUMANA (VIH)

En esta investigación se tomó como base un molde de ARN (NASBA QT) para diagnóstico del VIH-1, se logró identificar ocho bandas importantes del VIH-1 de las cuales se consideraron como bandas diagnósticas específicas a: p24, p31, gp41 y gp120. La prueba de western blot se estandarizó usando electroforesis en gel de poliacrilamida con dodecil sulfato de sodio (SDS PAGE). Los resultados no obtuvieron sensibilidad al 100% por el motivo que p24 y p31 disminuye los anticuerpos en fase de SIDA.

 

Figura 1. Reactividad del WESTERN BLOT para la detención de anticuerpos: (C+1) positivo a VIH en suero; (C-1) negativo a VIH en suero; (C+2) positivo en VIH en plasma; (C-2) negativo a VIH en plasma.

 

REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS: 1. Miranda Ulloa EF, Romero Ruiz S, Amorín Uscata B, Serrano Segura K, Briceño Espinoza R, Cárdenas Bustamante F. Standardization and validation of a western blot for the diagnosis of human immunodeficiency virus. Rev Fac Med Humana [Internet]. 2021 [citado el 23 de junio de 2024];21(4):674–81. Disponible en: https://revistas.urp.edu.pe/index.php/RFMH/article/view/4023

REACCIÓN EN CADENA POLIMERASA PARA EL DIAGNÓSTICO DE LA TUBERCULOSIS EXTRAPULMONAR Y DE LAS MICOBACTERIOSIS

TEMA: Diagnóstico de la Tuberculosis Extrapulmonar y la Micobacteriosis 

OBJETIVO: Implementación de la PCR para un diagnostico más rapido y la contribución a nuevas implementaciones  de tratamientos para la Tuberculosis y Micobacteriosis

MUESTRA BIOLÓGICA: Secreciones y biopsias

TIPO DE ÁCIDO NUCLEICO: ADN Genómico

EXTRACCIÓN:

1.Tratamiento de las muestras de esputo con "Fosfato trisódico"

2.Centrifugación de las muestras a 4.000g durante 30 minutos

3. Resuspensión del sedimiento en solución amortiguadora "TE"

4.Adicción de SDS y proteinasa "K" e incubación

5. Extracción del ADN  mediante "alcohol isoamílico"

6. Precipitación con "isopropanol absoluto"

7. Resuspensión del ADN en solución amortiguadora  "TE 0,1x"

GENES POR ANALIZAR: IS6110 ( 245 pb) y hsp65 (439 pb)

TIPO DE PCR: PCR Convencional

PASOS:

Desnaturalización: 96°C por 5 minutos

Hibridacción: 40 ciclos de 94°C, 60°C,  y  72° C por 2 minutos

Extensión: Ciclo final a 72°C por 7 minutos

VISUALIZACIÓN:  Productos amplificados en geles de agarosa al 1,4% mediante Electroforesis.

MUESTRA 296: El porcentaje de biopsia de piel presenta un patrón de restricción característico de Mycobacterium chelonae tipo 1 (BstE II: 325,130) Y (Hae III 200, 6o)

MUESTRA 370: El porcentaje de secreción de abdomen presenta un patron de restricción característico de Mycobacterium abcessus tipo 2 (BstE II 240, 210) Y (Hae III 200, 70)

MUESTRA 901: El porcentaje de la muestra de esputo presenta un patrón  de restricción característico de Mycobcaterium kansasii tipo 2 (BstE II 240, 130) Y (Hae III 13o, 105)

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS:

 1. Puerto G, Castro CM, Ribón W. Reacción en cadena de la polimerasa: una contribución para el diagnóstico de la tuberculosis extrapulmonar y de las micobacteriosis. Infectio [Internet]. 2007 [citado el 16 de junio de 2024];11(2):97–100. Disponible en: http://www.scielo.org.co/scielo.php?pid=S0123-93922007000200005&script=sci_arttext

ALTERACIONES DE LA EPIGENÉTICA EN LA HEPATITIS AUTOINMUNE

La alteración epigenética en la Hepatitis Autoinmune inducida por factores ambientales o heredados pueden influir en el desarrollo de la enfermedad, pues se indica que la activación de genes proinflamatorios en enfermedades autoinmunes (EA) está asociada con la hipometilación  del ADN y modifación de histonas. Además, se señala que los miARNs específicos son clave en la regulación de la respuesta inmune y la inflamación en (EA), participando en la supresión de genes proinflamatorios y el mantenimiento de células "T" reguladoras.

Figura 1. Modificaciones epigenéticas que afectan la actividad transcripcional de los genes. El ADN se envuelve alrededor de los nucleosomas, dentro de la cromatina nuclear y estos nucleosomas consisten en octámeros de proteínas histonas (H3, H4, H2A Y H4B). La envoltura del ADN puede alterarse mediante metilación o por modificaciones de aminoácidos terminales en la cola de las proteínas histonas por acetilación, mutilación, fosforilación o ubiquitinación. El miARN puede unirse al ARNm y marcarlo para su degradación proteasomal limitando a si la producción de productos genéticos nocivos (silenciamiento génico).

Obtenido de: https://onlinelibrary.wiley.com/doi/abs/10.1111/eci.12899

 REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS:

1. Czaja AJ. Epigenetic changes and their implications in autoimmune hepatitis. Eur J Clin Invest [Internet]. 2018;48(4). Disponible en: http://dx.doi.org/10.1111/eci.12899

ALTERACIONES DE LA TRADUCCIÓN EN LA DIABETES MELLITUS

 

 En este artículo se enfatiza la importancia de la traducción génica, en la respuesta al estrés del retículo endoplásmatico y de como su alteración esta relacionada con la sensibilidad a la obesidad inducida por la dieta y la resistencia a la insulina. Se mencionan genes como IRE1α, 4E-PB2, IL-1β, PPAR-y, GLP-1 y DPP-IV, que desempeñan roles clave en la fisiopatología de la diabetes al modular la respuesta al estrés del retículo endoplásmatico y la función de las células β.

FIGURA 1. Se muestran cuatro fases generales de la traducción: Iniciación, elongación, terminación y reciclaje. La figura muestra los componentes ribosomicos individuales (40S y 60S) y los factores de iniciación específicos (eIF), los factores de elongación (eEF), los factores de liberación (eER), que participan en el proceso de traducción del ARNm.

 Obtenido de: https://dom-pubs.onlinelibrary.wiley.com/doi/epdf/10.1111/dom.12163

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS: 

 

1. Evans-Molina C, Hatanaka M, Mirmira RG. Lost in translation: endoplasmic reticulum stress and the decline of β‐cell health in diabetes mellitus. Diabetes Obes Metab [Internet]. 2013;15(s3):159–69. Disponible en: http://dx.doi.org/10.1111/dom.12163