REACCIÓN EN CADENA POLIMERASA PARA EL DIAGNÓSTICO DE LA TUBERCULOSIS EXTRAPULMONAR Y DE LAS MICOBACTERIOSIS

TEMA: Diagnóstico de la Tuberculosis Extrapulmonar y la Micobacteriosis 

OBJETIVO: Implementación de la PCR para un diagnostico más rapido y la contribución a nuevas implementaciones  de tratamientos para la Tuberculosis y Micobacteriosis

MUESTRA BIOLÓGICA: Secreciones y biopsias

TIPO DE ÁCIDO NUCLEICO: ADN Genómico

EXTRACCIÓN:

1.Tratamiento de las muestras de esputo con "Fosfato trisódico"

2.Centrifugación de las muestras a 4.000g durante 30 minutos

3. Resuspensión del sedimiento en solución amortiguadora "TE"

4.Adicción de SDS y proteinasa "K" e incubación

5. Extracción del ADN  mediante "alcohol isoamílico"

6. Precipitación con "isopropanol absoluto"

7. Resuspensión del ADN en solución amortiguadora  "TE 0,1x"

GENES POR ANALIZAR: IS6110 ( 245 pb) y hsp65 (439 pb)

TIPO DE PCR: PCR Convencional

PASOS:

Desnaturalización: 96°C por 5 minutos

Hibridacción: 40 ciclos de 94°C, 60°C,  y  72° C por 2 minutos

Extensión: Ciclo final a 72°C por 7 minutos

VISUALIZACIÓN:  Productos amplificados en geles de agarosa al 1,4% mediante Electroforesis.

MUESTRA 296: El porcentaje de biopsia de piel presenta un patrón de restricción característico de Mycobacterium chelonae tipo 1 (BstE II: 325,130) Y (Hae III 200, 6o)

MUESTRA 370: El porcentaje de secreción de abdomen presenta un patron de restricción característico de Mycobacterium abcessus tipo 2 (BstE II 240, 210) Y (Hae III 200, 70)

MUESTRA 901: El porcentaje de la muestra de esputo presenta un patrón  de restricción característico de Mycobcaterium kansasii tipo 2 (BstE II 240, 130) Y (Hae III 13o, 105)

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS:

 1. Puerto G, Castro CM, Ribón W. Reacción en cadena de la polimerasa: una contribución para el diagnóstico de la tuberculosis extrapulmonar y de las micobacteriosis. Infectio [Internet]. 2007 [citado el 16 de junio de 2024];11(2):97–100. Disponible en: http://www.scielo.org.co/scielo.php?pid=S0123-93922007000200005&script=sci_arttext