TERAPIA EPIGENÓMICA EN EL CANCER DE CÉRVIX

• Tema: Metilación del ADN en el cancer de cuello uterino.
• Mecanismo epigenómico tratado: Metilación del ADN.
• ¿Como se lo hizo?: Con técnicas de secuenciación. Las ADN metiltrasferarasas (DNMT) trnsfieren un grupo metilo a citosinas alternas, generando 5-metilcitosina (5-mC). Esta metilación ocurre en las islas CpG, generalmente resulta en el silenciamiento de genes.
• Resultados: El uso de la metilación del ADN como biomarcador ha demostrado una mejora significativa en la calidad de vida de las pacientes con cáncer de cervix tratadas en etapas trempranas. Al emplear la metilación de los promotores CADM1, MAL y miR24 como biomarcadores  para lesiones cervicales intraepiteliales transformadoras, se obtuvieron resultados positivos en el diagnostico del cuello uterino.

Figura 1. Interacción entre la metilación del ADN y la hidroximetilación del ADN en el desarrollo del tumor

Obtenido de:https://www.frontiersin.org/journals/genetics/articles/10.3389/fgene.2020.00347/full

REFRENCIAS BIBLIOGRÁFICAS: 

1. Zhu H, Zhu H, Tian M, Wang D, He J, Xu T. DNA methylation and hydroxymethylation in cervical cancer: Diagnosis, prognosis and treatment. Front Genet [Internet]. 2020;11. Disponible en: http://dx.doi.org/10.3389/fgene.2020.00347

EDICIÓN DE ÁCIDOS NUCLEICOS EN LA DISTROFIA MUSCULAR DE DUCHENNE

Tipo de edición: In vivo - somática.

Dirigido hacia: Regiones intrónicas dentro de la duplicación del gen DMD, específicamente en el intrón 9 del gen.

Dirigido por: ARN guía único (sgRNA único).

Organo a tratar: Músculo esqueletico.

Via de administración: 

• Transducción  de los mioblastos con vectores lentivirales integradores.
• Electroporación de plasmidos que expresan CRISPR/Cas 9.

      Resultados

•      Corto plazo (1 año): Tras meses despues de la intervención se logra una producción efectiva de distrofia funcional en las celulas musculares tratadas, aunque no se muestra mejoras en la función muscular se anticipa una estabilización o leve mejora en la fuerza muscular y la funcion fisica.
•      Mediano plazo (3 años): El artículo no menciona pero a esta estancia ya existe una mejora significativa en la cantidad de proteina funcional presente en el tejido muscular.
•      Largo plazo (5 años): Tampoco hay resultados en el artículo pero se espera que la edición genetica logre producción continua y estable de distrofina en las celulas musculares a lo largo del tiempo.

Figura 1. Reducción de la proteína distrofina mutada en células DUPmyo transducidas con LCR2.

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS: 

1. Pini V, Mariot V, Dumonceaux J, Counsell J, O’Neill HC, Farmer S, et al. Transiently expressed CRISPR/Cas9 induces wild-type dystrophin in vitro in DMD patient myoblasts carrying duplications. Sci Rep [Internet]. 2022 [citado el 26 de agosto de 2024];12(1):1–13. Disponible en: https://www.nature.com/articles/s41598-022-07671-w

Terapia con Stem Cells en úlceras crónicas por dermolipectomía

TEMA: Tratamiento regenerativo con células madre mesenquimales provenientes de la gelatina de Wharton de cordón umbilical en la ulcera crónica por dermolipectomía.

TIPO DE STEM CELL: Células madre mesenquimatosas (CMM), específicamente aisladas de la gelatina de Wharton del cordón umbilical, conocidas por su baja inmunogenicidad y propiedades inmunomoduladoras.

METODO DE OBTENCIÓN: Se realizo a partir de cordones umbilicales de madres saludables que llegaron a término de gestación:

• Se hizo una selección de cordones umbilicales, se lavaron y se procesaron.
• Se aplicó Colagenasa tipo 2 por 60 minutos a 37.5 °C, facilitando la liberación de las células madre de su entorno natural del tejido.
• Se aplico Tripsina durante 30 minutos a 37.5 °C, para eliminar proteínas que aún pueden estar unidas a las células madre después de haber aplicado la Colagenasa.

VÍA DE ADMINISTRACIÓN:  Su administración es intradérmica, una vez listas las células se las suspende en una solución salina isotónica estéril:

• Se realiza un lavado y desinfección de la zona de aplicación en los bordes y el lecho de la lesión.
• Se administra aproximadamente 100,000 células por cm al cuadrado de herida.

RESULTADOS A CORTO PLAZO: Al séptimo día de tratamiento la lesión muestra una reducción significativa en su extensión, profundidad y grosor con una tasa de cierre del 70% y una mejora notable en la cicatrización.

RESULTADOS A MEDIANO PLAZO: Disminución en la filtración de leucocitos y citocinas proinflamatorias lo que reduce aún más la inflamación y el dolor, en este plazo de tiempo se llega a una cicatrización completa.

RESULTADOS A LARGO PLAZO: Como tal el articulo no menciona estos resultados por su eficacia a un corto plazo, pero la importancia a largo plazo bordea que la cicatrización ya seria estable, brindando una menor recurrencia de las ulceras dejando como resultado una sostenibilidad duradera.

Figura 1.  Muestras de resultados a días del tratamiento con (CMM) en las úlceras por dermolipectomía. Obtenida de: https://www.scielo.org.mx/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S2444-054X2019000700008

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS:

1. Mejía-Barradas CM, Cázares-Montañez JE, Guerra-Márquez Á, Hernández-Chávez VG, Cáceres-Cortés JR, Gutiérrez-Iglesias G. Tratamiento regenerativo con células madre mesenquimales provenientes de la gelatina de Wharton de cordón umbilical en la úlcera crónica por dermolipectomía. Cir Cir [Internet]. 2019 [citado el 19 de agosto de 2024];87(91):8–16. Disponible en: https://www.scielo.org.mx/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S2444-054X2019000700008

 

ANIMALES TRANSGÉNICOS - RATÓN TRANSGÉNICO PARA EL ESTUDIO DEL ALZHEIMER

 Estrés oxidativo, respuesta inmune, plasticidad y sináptica en modelos transgénicos de enfermedad de Alzheimer

Tipo de animal transgénico: Ratón transgénico, tipos y sus genes:

• Ratón trangenico 3xtgAD; APP, PSEN1 y MAPT (knock-In)
• Ratón transgenico 5xFAD; APP, PSEN1 con multiples mutaciones (Knock-In)
• Ratón transgénico Tg2576; APP (knock-In)
• Ratón transgénico APP/PS1; APP Y PSEN1 (Knock-In)
• Ratón transgénico rTg4510; MAPT (tau mutante) (Knock-In).(1)

Método de obtención: 

• Se selecciona genes relacionados con la enfermedad como la APP, MAPT(tau), los cuales son crusiales para el estudio de la patologia amiloide y tau 
• Se diseña un vector de expresión que contiene: promotor, secuencias de señalización y marcadores de selección 
• Aislamiento y transferencia de células madre embrionarias con el vector usando metodos como: Electroporación y lipofección
• Se cultiva células en un medio que contiene antibiótico, solo las celulas que han incorporado el vector sobreviviran
• Microinyección e implantación: Las celulas madre embrionarias seleccionadas seran inyectadas a los blastocitos y estos se implantaran en madres de alquiler
• Analisis genético a los ratones como el PCR o Western blot para comprobar la portación de la modificación genetica y la confirmación de su expresión tanto de APP, PSEN1 y tau. (2)

Objetivo:

• Replicación de la enfermedad - Analisis de mecanismos moleculares 
• Se identifico que el estrés oxidativo contribuye a la neurodegeneración y al deterioro cognitivo en la EA
• La microglía de diferentes genotipos como DAM y MGnD afecta a la respuesta inmune afectando la perdida sinaptica y neurodegneración, la sobreexpresión de TREM2 presenta acumulación de placas amiloides
• Según lo observado las proteinas como: GluA3 y Glua4 asociadas con la plasticidad se correlacionan con el deterioro cognitivo. (1)

Imagen 1.  Ratones Transgénicos en Investigación Biomédica [Internet]. Sebbm.es. [citado el 28 de julio de 2024]. Disponible en: https://sebbm.es/rincon-del-aula/ratones-transgenicos-en-investigacion-biomedica/

VENTAJAS:

1. En modelos precisos de enfermedades humanas los animales transgénicos pueden ser diseñados para optar mutaciones genéticas específicas que permiten el estudio preciso de estas condiciones
2. Desarrollo de nuevos tratamientos, medicamentos y terapias, ya que permiten comprobar la eficacia y seguridad
3. Compresión de la función genética y de como sus alteraciones pueden provocar enfermedades
4. Producción de proteinas terapeuticas, facilitando la producción de medicamentos biologicos
5. Validación de biomarcadores y desarrollo de terapias personalizadas. (3)

DESVENTAJAS

1. Cuestión de ética sobre el bienestar animal y la manipulación de la genética
2. Riesgos de salud y seguridad ya que ciertos animales transgénicos pueden desarrollar problemas de salud imprevistos
3. Impacto en la biodiversidad si estos animales transgenicos son liberados accidentalmente en el medio ambiente
4. Costos elevados lo que limita su uso a laboratorios 
5. Resultados no siempre transferibles a humanos por ciertas diferencias transgenicas. (3)

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS:

1. Bello-Medina PC, González-Franco DA, Vargas-Rodríguez I, Díaz-Cintra S. Estrés oxidativo, respuesta inmune, plasticidad sináptica y cognición en modelos transgénicos de la enfermedad de Alzheimer. Neurologia [Internet]. 2022;37(8):682–90. Disponible en: http://dx.doi.org/10.1016/j.nrl.2019.06.002

2. Transgénesis [Internet]. IACS. Instituto Aragonés de Ciencias de la Salud; 2016 [citado el 28 de julio de 2024]. Disponible en: https://www.iacs.es/servicios/servicios-cientifico-tecnicos/animalario/transgenesis/

3 . Animales transgénicos características ventajas y desventajas [Internet]. Docuciencia. 2020 [citado el 28 de julio de 2024]. Disponible en: https://www.docuciencia.es/animales-transgenicos-caracteristicas-ventajas-y-desventajas/

ADN RECOMBINANTE

Terapia del lupus eritematoso sistémico mediante fármacos recombinantes ADN-REC

Tema: Anticuerpos monoclonales y el tratamiento del lupus erimatoso sistémico

Objetivo: Tratamiento

Gen o secuencia a clonar: TNFSF13B

Enzima de restricción: Ecorl

Enzima ligasa: Timidilato ligasa

Vector: fScFv

Célula receptora: Receptor de linfocitos B (BLyS)

MTG (método de inserción del gen):  Electroporación y transformación

MIC (método de identificación de clones): Cultivo, prueba de reactividad de la linea célular hibrida, PCR, secuenciación de ADN y analisis de expresión génica. (1) (2)

Ácidos nucleicos recombinantes en la naturaleza

Chlamydomonas reinhardtii para la producción de proteínas recombinantes

Chlamydomonas reinhardtii se destaca como una plataforma biotecnológica innovadora para la producción de proteínas recombinantes, gracias a su capacidad para expresar eficientemente estas proteínas en el cloroplasto, donde se logra una mayor acumulación y un correcto plegamiento. Esta microalga puede crecer en diversas condiciones: autótrofas, heterótrofas, y mixótrofa, y ha demostrado ser capaz de producir proteínas terapéuticas, anticuerpos y vacunas, lo que la convierte en un recurso valioso para la biomedicina. (3)

Figura 1.  Chavarría-Tapia, A., Fernández-Corella, A., Marenco-Acosta, H., Shen-Zhou, Y., Ugalde-Zumbado, M., & Mora-Román, J. J. (2021). Anticuerpos monoclonales y el tratamiento del lupus eritematoso sistémico. Revista Tecnología en Marcha, 34(1), 25–39. https://doi.org/10.18845/tm.v34i1.4654

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS:

1. Chavarría-Tapia, A., Fernández-Corella, A., Marenco-Acosta, H., Shen-Zhou, Y., Ugalde-Zumbado, M., & Mora-Román, J. J. (2021). Anticuerpos monoclonales y el tratamiento del lupus eritematoso sistémico. Revista Tecnología en Marcha, 34(1), 25–39. https://doi.org/10.18845/tm.v34i1.4654

2.  Org.co. [citado el 21 de julio de 2024]. Disponible en: http://www.scielo.org.co/pdf/inf/v10n3/v10n3a06.pdf

3. 1. Carreño-Campos C, Villarreal ML, Caltempa AO. El potencial del genoma del cloroplasto de Chlamydomonas reinhardtii para la producción de proteínas recombinantes [Internet]. Smbb.mx. [citado el 22 de julio de 2024]. Disponible en: https://smbb.mx/wp-content/uploads/2021/12/Carreno-Campos-et-al.-2021.pdf

ESTANDARIZACIÓN Y VALIDACIÓN DE UN WESTERN BLOT PARA EL DIAGNÓSTICO DEL VIRUS DE INMUNODEFICIENCIA HUMANA (VIH)

En esta investigación se tomó como base un molde de ARN (NASBA QT) para diagnóstico del VIH-1, se logró identificar ocho bandas importantes del VIH-1 de las cuales se consideraron como bandas diagnósticas específicas a: p24, p31, gp41 y gp120. La prueba de western blot se estandarizó usando electroforesis en gel de poliacrilamida con dodecil sulfato de sodio (SDS PAGE). Los resultados no obtuvieron sensibilidad al 100% por el motivo que p24 y p31 disminuye los anticuerpos en fase de SIDA.

 

Figura 1. Reactividad del WESTERN BLOT para la detención de anticuerpos: (C+1) positivo a VIH en suero; (C-1) negativo a VIH en suero; (C+2) positivo en VIH en plasma; (C-2) negativo a VIH en plasma.

 

REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS: 1. Miranda Ulloa EF, Romero Ruiz S, Amorín Uscata B, Serrano Segura K, Briceño Espinoza R, Cárdenas Bustamante F. Standardization and validation of a western blot for the diagnosis of human immunodeficiency virus. Rev Fac Med Humana [Internet]. 2021 [citado el 23 de junio de 2024];21(4):674–81. Disponible en: https://revistas.urp.edu.pe/index.php/RFMH/article/view/4023

REACCIÓN EN CADENA POLIMERASA PARA EL DIAGNÓSTICO DE LA TUBERCULOSIS EXTRAPULMONAR Y DE LAS MICOBACTERIOSIS

TEMA: Diagnóstico de la Tuberculosis Extrapulmonar y la Micobacteriosis 

OBJETIVO: Implementación de la PCR para un diagnostico más rapido y la contribución a nuevas implementaciones  de tratamientos para la Tuberculosis y Micobacteriosis

MUESTRA BIOLÓGICA: Secreciones y biopsias

TIPO DE ÁCIDO NUCLEICO: ADN Genómico

EXTRACCIÓN:

1.Tratamiento de las muestras de esputo con "Fosfato trisódico"

2.Centrifugación de las muestras a 4.000g durante 30 minutos

3. Resuspensión del sedimiento en solución amortiguadora "TE"

4.Adicción de SDS y proteinasa "K" e incubación

5. Extracción del ADN  mediante "alcohol isoamílico"

6. Precipitación con "isopropanol absoluto"

7. Resuspensión del ADN en solución amortiguadora  "TE 0,1x"

GENES POR ANALIZAR: IS6110 ( 245 pb) y hsp65 (439 pb)

TIPO DE PCR: PCR Convencional

PASOS:

Desnaturalización: 96°C por 5 minutos

Hibridacción: 40 ciclos de 94°C, 60°C,  y  72° C por 2 minutos

Extensión: Ciclo final a 72°C por 7 minutos

VISUALIZACIÓN:  Productos amplificados en geles de agarosa al 1,4% mediante Electroforesis.

MUESTRA 296: El porcentaje de biopsia de piel presenta un patrón de restricción característico de Mycobacterium chelonae tipo 1 (BstE II: 325,130) Y (Hae III 200, 6o)

MUESTRA 370: El porcentaje de secreción de abdomen presenta un patron de restricción característico de Mycobacterium abcessus tipo 2 (BstE II 240, 210) Y (Hae III 200, 70)

MUESTRA 901: El porcentaje de la muestra de esputo presenta un patrón  de restricción característico de Mycobcaterium kansasii tipo 2 (BstE II 240, 130) Y (Hae III 13o, 105)

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS:

 1. Puerto G, Castro CM, Ribón W. Reacción en cadena de la polimerasa: una contribución para el diagnóstico de la tuberculosis extrapulmonar y de las micobacteriosis. Infectio [Internet]. 2007 [citado el 16 de junio de 2024];11(2):97–100. Disponible en: http://www.scielo.org.co/scielo.php?pid=S0123-93922007000200005&script=sci_arttext